Plasmid prep 할때 buffer의 역할

Alkaline lysis 방법으로 plasmid prep을 수행할 때 각 buffer의 역할 Resuspension Buffer (Tris-HCl, EDTA) : Tris-Cl은 완충작용을 하고 EDTA는 세포벽을 군데군데 깨주는 역할을 합니다. 참고로 EDTA는 세포벽의 integrity를 유지하는데 필수적인 calcium ion을 제거하여 세포벽이 군데군데 무너지게 하며 2가 양이온을 필요로 하는 DNase 등의 효소 활성을 없애 주는 역할도 합니다. 이 때 glucose나 sucrose가 첨가되어 삼투압을 유지시켜 세포의 형태를 유지하도록 할 수도 있습니다. 때로는 lysozyme(peptidolycan 제거)를 쓰기도 합니다. Lysis Buffer (SDS, NaOH) ; SDS는 ionic detergent로 세포막을 파괴시키는데 그렇게 되면 세포안에 있던 chromosomal DNA와 플라스미드 DNA는 밖으로 나옵니다. 이 때 NaOH, 즉 알칼리 용액에 노출된 DN...