Western Blot 용 Protein Extraction

#westernblot 을 위한 #protein추출 feat. Raw 264.7 cell line RAW cell의 경우 #nitric oxide 가 충분히 생성되어야 하므로 cell양을 좀 많이 해준다. 1. cell seeing 하기 : 개인적으로는 60파이 Dish에 5 X 10^5 로 seeding 을 하는 편이다. 2. 농도별로 약물 트리트 하고 한시간 후 LPS 처리 (일반적 논문 참조하여 1ug/ml 농도로) 3. cell scrapper로 15ml 튜브에 옮겨서 centrifuge 돌리고 supernant 제거후 PBS 세척 후 한번 더 돌린다. 4. 얼음통에 cell pellet만 있는 tube 담아서 준비 5. Proprep은 50-100ul 정도 넣어서 cell을 풀고 ependorf tube에 옮긴다. 6. 옮긴후 vortex -> -20도 냉장고에 10분정도 보관한다 7. centrifuge 비어있는 상태에서 10분정도 돌려서 4도로 온도를 맞춘다 8. 냉장고...

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